原代小鼠肝脏细胞的高效分离纯化与培养

目的：建立一种能稳定获得高活力和高纯度原代小鼠肝脏细胞的分离、纯化及培养方法。方法：应用改良的Seglen 二步法原位灌注和机械离心分离肝脏细胞,并用改良的高糖DMEM培养基进行培养。台盼蓝拒染法检测接种时肝脏细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝脏细胞形态变化,应用免疫荧光技术对肝脏细胞进行Albumin 染色。结果：每只小鼠可获取肝脏细胞的总产量平均为1.35× 10^6 / g体重,肝脏细胞存活率＞ 90%。倒置显微镜下观察贴壁前肝细胞直径为35.14 滋m± 4.35 滋m,肝脏细胞在接种后3 h基本完成贴壁;肝脏细胞接种后24h,所有肝脏细胞均强阳性表达成熟肝脏细胞标志物Albumin,肝细胞纯度＞ 95%。结论：改良的分离纯化及培养方法能稳定获得高产量、高活率及高纯度的小鼠肝脏细胞。     

原代小鼠肝脏细胞的高效分离纯化与培养*

摘要目的：建立一种能稳定获得高活力和高纯度原代小鼠肝脏细胞的分离、纯化及培养方法。方法：应用改良的Seglen 二步法原 位灌注和机械离心分离肝脏细胞,并用改良的高糖DMEM培养基进行培养。台盼蓝拒染法检测接种时肝脏细胞的存活率,倒置 显微镜动态观察肝脏细胞形态变化,应用免疫荧光技术对肝脏细胞进行Albumin 染色。结果：每只小鼠可获取肝脏细胞的总产量 平均为1.35× 106 / g体重,肝脏细胞存活率＞ 90%。倒置显微镜下观察贴壁前肝细胞直径为35.14 滋m± 4.35 滋m,肝脏细胞在接种 后3 h基本完成贴壁;肝脏细胞接种后24h,所有肝脏细胞均强阳性表达成熟肝脏细胞标志物Albumin,肝细胞纯度＞ 95%。结 论：改良的分离纯化及培养方法能稳定获得高产量、高活率及高纯度的小鼠肝脏细胞。     

红霉素促动力作用的易感性与多巴胺受体D3和神经肽受体Y5

通过应用核素法测定糖尿病胃瘫大鼠的胃排空 ,建立了糖尿病胃瘫大鼠的模型 ;据此模型观察了小剂量红霉素 (3mg kg)对糖尿病胃瘫大鼠液相胃排空的影响。结果显示该药能够显著减小其胃排空的一小时残留率 (R1H) [(6 3%± 6 .8% )vs.(36 %± 3.8% ) ];但此作用具有显著个体差异 ,根据所设标准分成红霉素有效组 (E组 )和无效组 (F组 )后 ,发现两组疗效具有显著差异。应用受体相关基因芯片初步筛选了这两组大鼠胃窦组织的差异表达基因。结果筛选出 10条差异表达基因 ,其中对多巴胺受体D3和神经肽Y受体Y5基因进行了RT PCR半定量验证 ,结果与芯片一致 ,即D3和Y5基因在E组中的表达水平显著高于F组 [D3受体 :(0 .2 6± 0 .0 4 )vs.(0 .16± 0 .0 4 ) ;Y5受体 :(0 .94± 0 .10 )vs .(0 .6 8± 0 .0 9) ],而与正常对照组和阴性对照组间未见明显差异。结果表明 :小剂量红霉素可以改善糖尿病胃瘫大鼠的胃排空 ,其疗效有明显的个体差异 ;红霉素有效组多巴胺受体D3(DRD3)和神经肽受体Y5 (NPYY5 )表达水平显著高于红霉素无效组。提示这两种受体可能与红霉素促动力作用的易感性相关。     

ABCG5和ABCG8在胆囊胆固醇结石形成中的作用

腺苷三磷酸结合盒转运体G5和G8(ATP binding cassette transport G5,ABCG5和ATP binding cassette transport G8,ABCG8)位于构成管腔的细胞膜一端,使进入细胞内的固醇泵出到细胞外,参与胆固醇逆向转运(RCT)．在减少小肠和促进肝脏排泄固醇过程中发挥重要作用。突变后导致机体固醇蓄积,血浆固醇水平升高。ABCG5和ABCG8是促进胆囊胆固醇结石形成的关键因素。激动核受体LXR、RXR和FXR的途径对ABCG5和ABCG8的表达具有调控作用。     

Luminal A型和Luminal B型乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移发生率及预后的比较研究

目的:对比Luminal A型和Luminal B型乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移发生率及预后情况。方法:回顾性分析我院从2011年5月~2014年12月收治的乳腺癌患者180例作为研究对象。将其按照临床病理类型的差异分成Luminal A型组84例与Luminal B型组96例。比较两组临床病理特征、腋窝淋巴结转移发生率、5年复发率与生存率,比较两组患者超声学特征。结果:Luminal A型组年龄>50岁、肿瘤大小≤2 cm、组织分级Ⅰ级人数占比均高于Luminal B型组(P<0.05)。Luminal A型组腋窝淋巴结转移发生率为13.10%(11/84),显著低于Luminal B型组的39.58%(38/96)(P<0.05)。Luminal A型组和Luminal B型组患者的5年复发转移率对比差异无统计学意义(P>0.05),Luminal A型组5年生存率为86.90%(73/84),高于Luminal B型组的73.96%(71/96)(P<0.05)。Luminal A型组边界清晰、无钙化人数占比均高于Luminal B型组,而Alder为Ⅲ级人数占比低于Luminal B型组(P<0.05)。结论:Luminal A型乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移发生率低于Luminal B型乳腺癌患者,且两者的临床病理和超声学特征存在一定的差异,Luminal A型乳腺癌患者的预后优于Luminal B型。     

神经肽受体Y5亚型在大鼠胃的表达

应用RT—PCR、Western印迹和免疫组化技术研究神经肽受体亚型Y5在正常大鼠和胃轻瘫大鼠胃的表达,并进行组织学定位。发现Y5受体在大鼠胃存在着表达,主要表达定位在胃窦的黏膜层,可能与胃动力的调控有关。半定量分析显示胃轻瘫大鼠较正常大鼠表达水平下调。